Наиболее известный способ идентификации активированных клеток заклю-чается в определении у этих клеток под световым микроскопом морфологи¬ческих изменений, называемых бласттрансформацией.

В Т- и В-лимфоцитах, находящихся в фазе Gx, между 12 и 24 ч начинает увеличиваться масса как ядра, так и цитоплазмы, появляется крупное ядрышко и наблюдается фрагментация эухроматина. При этом, как видно в электронный

микроскоп, эндоплазматический ретикулум, полирибосомы и аппарат Гольджи находятся в цитоплазме. Количество таких клеток (бластов) можно определить с помощью гемоцитометра, идентифицируя их по наличию морфологических особенностей или с помощью электронных счетчиков клеток, исходя из объема клеток (объем бласта в 3—30 раз больше, чем объем «покоящейся» клетки). Основным изменением в структуре ядра оказывается увеличение объема меж-хроматинового вещества, обусловленное накоплением новосинтезированных белков, в том числе сократительных, например актина. В связи ...

Мы уже касались роли МНС в предыдущих разделах этой главы, в частно¬сти в связи со специфичностью хелперных и цитотоксических Т-клеток. Было отмечено, что рецепторы этих клеток распознают антигены совместно с продук-тами генов МНС класса I и класса II. МНС играет центральную роль во многих иммунологических явлениях, обеспечивая кодирование антигенов гистосов-местимости (трансплантационных антигенов), а также регуляцию иммунного ответа на обычные антигены.

МНС расположен в хромосоме 17 у мыши и хромосоме 6 у человека (рис. 1.9); он состоит из генов нескольких различных типов, среди которых имеются гены, кодирующие молекулы МНС класса I. Эти молекулы представ-ляют собой мембранные гликопротеины, обнаруживаемые на поверхности практически всех клеток. Они построены из двух полипептидных цепей: одной тяжелой с мол. массой 45 000 Да, кодируемой геном МНС, и связанной с ней нековалентно легкой цепью с мол. массой 12 000 Да (Р2-микроглобулин) (рис. 1.10). У мыши Р2-микрог ...

Хотя в покоящемся лимфоците, находящемся в фазе G0 клеточного цикла, ДНК не синтезируется, тем не менее в нем с небольшой скоростью идет синтез РНК и белков. Новообразованная РНК оказывается гетерогенной по размеру, а ее синтез компенсирует деградацию. На электронных микрофотографиях видно, что одиночные рибосомы рассеяны по цитоплазме. Из всей РНК покояще¬гося лимфоцита 85% приходится на рибосомную (рРНК).

Увеличение синтеза РНК вызывается стимуляцией лимфоцитов из пред-ставителей многих видов с помощью разнообразных митогенов и, по-видимому, является универсальным звеном активационной программы. Чаще всего за
ходом синтеза РНК следят по включению 3Н-уридина в кислотонерастворимую внутриклеточную фракцию за единицу времени. G помощью этого метода невозможно отличить усиление транспорта уридина (при котором количество меченой РНК может увеличиться за счет увеличения удельной радиоактивности пула предшественников) от повышения активности РНК-синтетаз. Кроме т ...

Когда в 90-х годах прошлого столетия осознали, что вызвать образование антител можно даже с помощью веществ небактериальной природы типа расти-тельных и сывороточных белков или эритроцитов, то для получения специфи-ческих антител стали вводить экспериментальным животным чуть ли не все мыслимые вещества, какие только попадались в руки иммунологам. Животных иммунизировали не только веществами чужеродного происхождения, цо также неизменными компонентами своего собственного организма. В ранних работах с введением животному собственной сыворотки и других жидкостей организма неизменно получались отрицательные результаты, и это позволило Эрлиху (Ehrlich) сформулировать его знаменитое выражение: страх самоотравления (horror autotoxicus), согласно которому по неизвестным причинам организм не способен к иммунному ответу против собственных компонентов. Однако другие исследователи не ограничивались изучением одних только растворимых веществ, и вскоре Мечников и другие показали, что иммунизация жив ...

Используя меченные флуоресцеином Fab-фрагменты антител к иммуногло-булинам, связанным с мембранами В-клеток, можно увидеть, что иммуногло-булины распределены по поверхности клетки довольно равномерно. Однако если вместо Fab-фрагментов взять бивалентные антитела, способные сшивать молекулы поверхностных иммуноглобулинов, то последние тут же преципити-руют в мембране с образованием флуоресцирующих пятен неправильной формы (пэтчей). Ингибировать образование пэтчей можно, лишь используя факторы, уменьшающие текучесть внешнего слоя плазматической мембраны — например, добавляя стеролы или понижая температуру.

За несколько минут образования пэтчей они соединяются с актином и мио-зином на внутренней стороне мембраны (рис. 12.2), затем объединяются друг с другом и мигрируют к одному из концов клетки (рис. 12.4). Флуоресценция концентрируется на одном полюсе клетки, напоминая при рассматривании в флуоресцентный микроскоп лунный серп. Поэтому ее называют колпачком (кэпом). Кэп може ...

В качестве модели для детального изучения наследуемых перекрестно-реагирующих идиотипов, в частности их тонкой структуры и серологических свойств, были использованы антитела к гаптену /г-азофениларсонату, которыебыли синтезированы мышами линии A/J. На рис. 7.30 приведена аминокислот-ная последовательность пяти моноклональных антител, из которых четыре име¬ли перекрестно-реагирующий идиотип, а у одного он не выявлялся вообще. Согласно этим данным, антитела, связывающие один и тот же гаптен и, кро¬ме того, обладающие перекрестно-реагирующим идиотипом, имеют очень сход-ную аминокислотную последовательность. В других опытах было выявлено значительное сходство между первичной структурой тяжелых цепей этих же антител. Оказалось, что одинаковыми являются не только остатки каркасных участков, но и гипервариабельные участки (в частности, первый и второй)практически идентичны. Подобное сходство, очевидно, отражает те структурные ограничения, которые накладываются связыванием гаптена и идиотипи ...

При активации тучных клеток посредством сшивки Рсс-рецепторов одним из самых ранних процессов, по-видимому, является активация мембранно-связанной эстеразы. Этот фермент ингибируется диизопропилфторофосфатом (ДФФ), который ковалентно связывается с сериновым остатком активного центра. Помимо эстеразы таким же образом ингибируются трипсин, химотрип-син, калликреин, плазмин и несколько других важных протеиназ. Путем активации аденилат-циклазы сериновая эстераза, как сейчас представляется, передает сигнал, вызывающий дегрануляцию тучных клеток. Кроме того, эстеразы, активируемые под действием внешнего сигнала, обнаружены также в тромбоцитах и нейтрофилах.
Имеются данные, согласно которым сериновая эстераза может быть акти-вирована в течение нескольких минут после сшивки поверхностных иммуно-глобулинов лимфоцита с помощью соответствующих антител. Поскольку ДФФ ингибирует резкое увеличение подвижности компонентов мышиных В-клеток, индуцируемое антителами против иммуноглобулинов, то во ...

J-цепь — это особый полипептид, необходимый, по-видимому, для иници-ирования полимеризации как IgA, так и IgM. Его молекулярная масса равна примерно 15 000, и он построен из остатков 129 аминокислот и одного сложногоуглеводного компонента. Первичная структура J-цепи показана на рис. 7.14. В молекуле имеется много отрицательно заряженных аминокислот и восемь полуцистиновых остатков, участвующих во внутрицепьевых и межцепьевых связях (см. обзор [35]).

J-цепь не имеет гомологии с иммуноглобулинами, и кодирующий ее ген расположен в хромосоме, не содержащей генов иммуноглобулинов [36]. У по-лимерных молекул IgM и IgA J-цепь одинакова, причем в каждой из них имеет-ся лишь по одной J-цепи, прикрепленной к С-концевому остатку цистина альфа-или мю-цепи. Вначале полагали, что полимеризация осуществляется серией
последовательных дисульфидных обменов. Однако в настоящее время известен полимеризующий фермент, связанный с мембранами активированных В-клеток, но отсутствующий у п ...

Различия в положении дисульфидных связей между классами тяжелых цепей заключаются в неодинаковой локализации мостика между тяжелыми и легкими цепями, наличии и расположении добавочных внутрицепьевых и внутрисубъединичных мостиков, а также в числе и локализации связей между тяжелыми цепями в шарнирной области. На рис. 7.19 дана схема всех этих связей. Следует, однако, заметить, что локализация некоторых из них точно еще не доказана.

Способность дисульфидных связей к восстановлению также неодинакова. Она зависит от конформации восстанавливаемой молекулы и доступности ди-сульфидных связей для восстановления. Легче всего, как правило, разрываются связи между субъединицами (мономерами). Для этого можно использовать сла-бые восстановители, например цистеин или 2-меркаптоэтаноламин, хотя могут применяться также и низкие концентрации 2-меркаптоэтанола или дитиотреи-тола. Для разрыва межцепьевых связей необходимо брать более сильные восста¬новители, такие, как 2-меркаптоэтанол ил ...

С помощью антиидиотипических антител можно следить за наследованием генетических маркеров вариабельных областей иммуноглобулинов, картировать гены вариабельных областей и изучать регуляцию экспрессии генов V. Идио¬типы были первыми маркерами, позволившими установить связь между генами вариабельных и константных областей. Большинство описанных идиотипиче-ских детерминант обнаруживается лишь у ограниченного числа линий живот¬ных. При скрещивании особей линий, иммуноглобулины которых различаются двумя генетическими маркерами, например идиотипом и аллотипом, иногда удается наблюдать рекомбинации между указанными маркерами (у потомства при скрещивании гибридов Гх с родительской линией). Прослеживая у таких животных экспрессию других генетических маркеров иммуноглобулинов и изме-ряя частоту рекомбинаций между любыми двумя маркерами, можно построить генетическую карту.

Несомненно, для такого подхода необходимо, чтобы антиидиотипические антитела были специфическими лишь к одному ...